Osteoartritis (OA) adalah salah satu penyakit sendi tulang degeneratif kronik jangka panjang yang memberi kesan kepada penduduk berumur lebih 65 tahun [
1]. Secara amnya, pesakit OA didiagnosis dengan rawan yang rosak, sinovium yang meradang, dan kondrosit yang terhakis, yang mencetuskan kesakitan dan tekanan fizikal [
2]. Kesakitan artritis kebanyakannya disebabkan oleh degenerasi rawan pada sendi oleh keradangan, dan apabila rawan rosak teruk, tulang boleh berlanggar antara satu sama lain menyebabkan kesakitan yang tidak tertanggung dan kesukaran fizikal [
3]. Penglibatan mediator radang dengan gejala seperti sakit, bengkak, dan kekakuan sendi didokumenkan dengan baik. Dalam pesakit OA, sitokin radang, yang menyebabkan hakisan rawan dan tulang subkondral ditemui dalam cecair sinovial [
4]. Dua aduan utama yang dialami oleh pesakit OA adalah sakit dan keradangan sinovial. Oleh itu, matlamat utama terapi OA semasa adalah untuk mengurangkan kesakitan dan keradangan. [
5]. Walaupun rawatan OA yang ada, termasuk ubat bukan steroid dan steroid, telah terbukti keberkesanannya dalam mengurangkan kesakitan dan keradangan, penggunaan jangka panjang ubat-ubatan ini mempunyai akibat kesihatan yang teruk seperti kardiovaskular, gastro-usus, dan disfungsi buah pinggang [
6]. Oleh itu, ubat yang lebih berkesan dengan kesan sampingan yang lebih sedikit perlu dibangunkan untuk rawatan osteoarthritis.
Produk kesihatan semulajadi semakin popular kerana selamat dan mudah didapati [
7]. Ubat tradisional Korea telah membuktikan keberkesanan terhadap beberapa penyakit radang, termasuk arthritis [
8]. Aucklandia lappa DC. terkenal dengan sifat perubatannya, seperti meningkatkan peredaran qi untuk melegakan kesakitan dan menenangkan perut, dan telah digunakan secara tradisional sebagai analgesik semulajadi [
9]. Laporan terdahulu mencadangkan bahawa A. lappa mempunyai anti-radang [
10,
11], analgesik [
12], antikanser [
13], dan gastroprotektif [
14] kesan. Pelbagai aktiviti biologi A. lappa disebabkan oleh sebatian aktif utamanya: costunolide, dehydrocostus lactone, dihydrocostunolide, costuslactone, α-costol, saussurea lactone dan costuslactone [
15]. Kajian terdahulu mendakwa bahawa costunolide menunjukkan sifat anti-radang dalam lipopolysaccharide (LPS), yang mendorong makrofaj melalui peraturan NF-kB dan laluan protein kejutan haba [
16,
17]. Walau bagaimanapun, tiada kajian telah menyiasat potensi aktiviti A. lappa untuk rawatan OA. Penyelidikan ini telah menyiasat kesan terapeutik A. lappa terhadap OA menggunakan (monosodium-iodoacetate) MIA dan model tikus yang disebabkan oleh asid asetik.
Monosodium-iodoacetate (MIA) terkenal digunakan untuk menghasilkan banyak tingkah laku sakit dan ciri patofisiologi OA pada haiwan [
18,
19,
20]. Apabila disuntik ke dalam sendi lutut, MIA mengganggu metabolisme kondrosit dan mendorong keradangan dan gejala keradangan, seperti hakisan tulang rawan dan subkondral, gejala utama OA [
18]. Tindak balas menggeliat yang disebabkan dengan asid asetik dianggap secara meluas sebagai simulasi kesakitan periferi pada haiwan di mana kesakitan keradangan boleh diukur secara kuantitatif [
19]. Barisan sel makrofaj tikus, RAW264.7, digunakan secara popular untuk mengkaji tindak balas selular terhadap keradangan. Selepas pengaktifan dengan LPS, makrofaj RAW264 mengaktifkan laluan keradangan dan merembeskan beberapa perantara keradangan, seperti TNF-α, COX-2, IL-1β, iNOS, dan IL-6 [
20]. Kajian ini telah menilai kesan anti-nociceptive dan anti-radang A. lappa terhadap OA dalam model haiwan MIA, model haiwan yang disebabkan oleh asid asetik, dan sel RAW264.7 yang diaktifkan LPS.
2. Bahan dan Kaedah
2.1. Bahan Tumbuhan
Akar kering A. lappa DC. yang digunakan dalam eksperimen diperoleh daripada Epulip Pharmaceutical Co., Ltd., (Seoul, Korea). Ia telah dikenal pasti oleh Prof. Donghun Lee, Jabatan farmakologi Herba, Kol. Perubatan Korea, Universiti Gachon, dan nombor spesimen baucar telah didepositkan sebagai 18060301.
2.2. Analisis HPLC Ekstrak A. lappa
A. lappa diekstrak menggunakan radas refluks (air suling, 3 jam pada 100 °C). Larutan yang diekstrak ditapis dan dipekatkan menggunakan penyejat tekanan rendah. Ekstrak A. lappa mempunyai hasil sebanyak 44.69% selepas pengeringan beku di bawah -80 °C. Analisis kromatografi A. lappa telah dijalankan dengan HPLC yang disambungkan menggunakan sistem 1260 InfinityⅡ HPLC (Agilent, Pal Alto, CA, USA). Untuk pemisahan kromatik, lajur EclipseXDB C18 (4.6 × 250 mm, 5 µm, Agilent) digunakan pada 35 °C. Sebanyak 100 mg spesimen telah dicairkan dalam 10 mL metanol 50% dan disonikasi selama 10 minit. Sampel ditapis dengan penapis picagari (Waters Corp., Milford, MA, USA) 0.45 μm. Komposisi fasa mudah alih ialah 0.1% asid fosforik (A) dan asetonitril (B) dan lajur dielusi seperti berikut: 0-60 min, 0%; 60–65 min, 100%; 65–67 min, 100%; 67–72 min, 0% pelarut B dengan kadar alir 1.0 mL/min. Efluen diperhatikan pada 210 nm menggunakan isipadu suntikan 10 μL. Analisis dilakukan dalam tiga kali ganda.
2.3. Perumahan dan Pengurusan Haiwan
Tikus jantan Sprague-Dawley (SD) berumur 5 minggu dan tikus ICR jantan berumur 6 minggu telah dibeli dari Samtako Bio Korea (Gyeonggi-do, Korea). Haiwan disimpan di dalam bilik menggunakan suhu malar (22 ± 2 °C) dan kelembapan (55 ± 10%) dan kitaran terang/gelap 12/12 jam. Haiwan itu telah membiasakan diri dengan keadaan itu selama lebih daripada seminggu sebelum eksperimen dimulakan. Haiwan mempunyai bekalan makanan dan air secara ad libitum. Peraturan etika semasa untuk penjagaan dan pengendalian haiwan di Universiti Gachon (GIACUC-R2019003) dipatuhi dengan ketat dalam semua prosedur eksperimen haiwan. Kajian itu direka bentuk percubaan buta penyiasat dan selari. Kami mengikuti kaedah euthanasia mengikut garis panduan Jawatankuasa Etika Eksperimen Haiwan.
2.4. Suntikan dan Rawatan MIA
Tikus diasingkan secara rawak kepada 4 kumpulan iaitu sham, control, indomethacin, dan A. lappa. Dibius dengan 2% campuran isofluorane O2, tikus disuntik menggunakan 50 μL MIA (40 mg/m; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, Amerika Syarikat) secara intra-artikular ke dalam sendi lutut untuk membawa kepada OA eksperimen. Rawatan telah dijalankan seperti di bawah: kumpulan kawalan dan palsu dikekalkan hanya dengan diet asas AIN-93G. Hanya, kumpulan indometasin dibekalkan dengan indometasin (3 mg/kg) dimasukkan ke dalam diet AIN-93G dan kumpulan A. lappa 300 mg/kg diberikan kepada diet AIN-93G ditambah dengan A. lappa (300 mg/kg). Rawatan diteruskan selama 24 hari sejak hari induksi OA pada kadar 15-17 g setiap 190-210 g berat badan setiap hari.
2.5. Pengukuran Galas Berat
Selepas induksi OA, pengukuran kapasiti menanggung berat anggota belakang tikus dilakukan dengan ketidakupayaan-MeterTester600 (IITC Life Science, Woodland Hills, CA, USA) seperti yang dijadualkan. Pengagihan berat pada anggota belakang dikira: kapasiti galas berat (%)
