Osteoartritis (OA) merupakan salah satu penyakit sendi tulang degeneratif kronik jangka panjang yang menjejaskan populasi warga emas melebihi 65 tahun [1].
1Secara amnya, pesakit OA didiagnosis dengan rawan yang rosak, sinovium yang meradang, dan kondrosit yang terhakis, yang mencetuskan kesakitan dan tekanan fizikal [
2Kesakitan artritis kebanyakannya disebabkan oleh degenerasi rawan pada sendi akibat keradangan, dan apabila rawan rosak teruk, tulang boleh bertembung antara satu sama lain menyebabkan kesakitan yang tidak tertanggung dan kesusahan fizikal [
3Penglibatan mediator keradangan dengan gejala seperti sakit, bengkak, dan kekakuan sendi telah didokumentasikan dengan baik. Pada pesakit OA, sitokin keradangan, yang menyebabkan hakisan rawan dan tulang subkondral, terdapat dalam cecair sinovial [
4Dua aduan utama yang biasanya dialami oleh pesakit OA ialah kesakitan dan keradangan sinovial. Oleh itu, matlamat utama terapi OA semasa adalah untuk mengurangkan kesakitan dan keradangan.
5Walaupun rawatan OA yang ada, termasuk ubat bukan steroid dan steroid, telah terbukti berkesan dalam mengurangkan kesakitan dan keradangan, penggunaan ubat-ubatan ini dalam jangka masa panjang mempunyai akibat kesihatan yang teruk seperti disfungsi kardiovaskular, gastrousus dan buah pinggang [
6Oleh itu, ubat yang lebih berkesan dengan kesan sampingan yang lebih sedikit perlu dibangunkan untuk rawatan osteoartritis.
Produk kesihatan semula jadi semakin popular kerana selamat dan mudah didapati [
7Ubat-ubatan tradisional Korea telah terbukti berkesan terhadap beberapa penyakit radang, termasuk artritis [
8Aucklandia lappa DC. dikenali dengan khasiat perubatannya, seperti meningkatkan peredaran qi untuk melegakan kesakitan dan melegakan perut, dan telah digunakan secara tradisional sebagai analgesik semula jadi [
9Laporan terdahulu menunjukkan bahawa A. lappa mempunyai anti-radang [
10,
11], analgesik [
12], antikanser [
13], dan gastroprotektif [
14] kesan. Pelbagai aktiviti biologi A. lappa disebabkan oleh sebatian aktif utamanya: costunolide, dehydrocostus lactone, dihydrocostunolide, costuslactone, α-costol, saussurea lactone dan costuslactone [
15Kajian terdahulu mendakwa bahawa costunolide menunjukkan sifat anti-radang dalam lipopolisakarida (LPS), yang mendorong makrofaj melalui pengawalaturan laluan NF-kB dan protein kejutan haba [
16,
17Walau bagaimanapun, tiada kajian yang mengkaji potensi aktiviti A. lappa untuk rawatan OA. Kajian ini telah mengkaji kesan terapeutik A. lappa terhadap OA menggunakan MIA (monosodium-iodoasetat) dan model tikus yang disebabkan oleh asid asetik.
Monosodium-iodoasetat (MIA) terkenal digunakan untuk menghasilkan banyak tingkah laku kesakitan dan ciri patofisiologi OA pada haiwan [
18,
19,
20Apabila disuntik ke dalam sendi lutut, MIA mengganggu metabolisme kondrosit dan menyebabkan keradangan dan gejala keradangan, seperti hakisan tulang rawan dan subkondral, gejala utama OA [
18]. Tindak balas menggeliat yang disebabkan oleh asid asetik secara meluas dianggap sebagai simulasi kesakitan periferi pada haiwan di mana kesakitan keradangan boleh diukur secara kuantitatif [
19Barisan sel makrofaj tikus, RAW264.7, digunakan secara meluas untuk mengkaji tindak balas selular terhadap keradangan. Setelah diaktifkan dengan LPS, makrofaj RAW264 mengaktifkan laluan keradangan dan merembeskan beberapa perantara keradangan, seperti TNF-α, COX-2, IL-1β, iNOS dan IL-6 [
20Kajian ini telah menilai kesan anti-nosiseptik dan anti-radang A. lappa terhadap OA dalam model haiwan MIA, model haiwan yang diaruh oleh asid asetik dan sel RAW264.7 yang diaktifkan oleh LPS.
2. Bahan dan Kaedah
2.1. Bahan Tumbuhan
Akar kering A. lappa DC. yang digunakan dalam eksperimen ini diperoleh daripada Epulip Pharmaceutical Co., Ltd., (Seoul, Korea). Ia telah dikenal pasti oleh Prof. Donghun Lee, Jabatan Farmakologi Herba, Kolonel Perubatan Korea, Universiti Gachon, dan nombor spesimen baucar telah disimpan sebagai 18060301.
2.2. Analisis HPLC Ekstrak A. lappa
A. lappa diekstrak menggunakan radas refluks (air suling, 3 jam pada 100 °C). Larutan yang diekstrak ditapis dan dipekatkan menggunakan penyejat tekanan rendah. Ekstrak A. lappa mempunyai hasil sebanyak 44.69% selepas pengeringan beku di bawah suhu −80 °C. Analisis kromatografi A. lappa dijalankan dengan HPLC yang disambungkan menggunakan sistem HPLC 1260 InfinityⅡ (Agilent, Pal Alto, CA, USA). Untuk pemisahan kromatik, lajur EclipseXDB C18 (4.6 × 250 mm, 5 µm, Agilent) telah digunakan pada suhu 35 °C. Sebanyak 100 mg spesimen telah dicairkan dalam 10 mL 50% metanol dan disonikasi selama 10 minit. Sampel telah ditapis dengan penapis picagari (Waters Corp., Milford, MA, USA) bersaiz 0.45 μm. Komposisi fasa bergerak ialah 0.1% asid fosforik (A) dan asetonitril (B) dan lajur tersebut dielusi seperti berikut: 0–60 min, 0%; 60–65 min, 100%; 65–67 min, 100%; 67–72 min, 0% pelarut B dengan kadar aliran 1.0 mL/min. Efluen diperhatikan pada 210 nm menggunakan isipadu suntikan 10 μL. Analisis dilakukan dalam tiga kali ganda.
2.3. Perumahan dan Pengurusan Haiwan
Tikus Sprague–Dawley (SD) jantan berumur 5 minggu dan tikus ICR jantan berumur 6 minggu telah dibeli daripada Samtako Bio Korea (Gyeonggi-do, Korea). Haiwan-haiwan tersebut dikurung di dalam bilik menggunakan suhu malar (22 ± 2 °C) dan kelembapan (55 ± 10%) serta kitaran terang/gelap selama 12/12 jam. Haiwan-haiwan tersebut telah dibiasakan dengan keadaan tersebut selama lebih seminggu sebelum eksperimen bermula. Haiwan-haiwan tersebut mempunyai bekalan makanan dan air secara ad libitum. Peraturan etika semasa untuk penjagaan dan pengendalian haiwan di Universiti Gachon (GIACUC-R2019003) telah dipatuhi dengan ketat dalam semua prosedur eksperimen haiwan. Kajian ini direka bentuk secara percubaan selari dan buta penyiasat. Kami mengikuti kaedah euthanasia mengikut garis panduan Jawatankuasa Etika Eksperimen Haiwan.
2.4. Suntikan dan Rawatan MIA
Tikus-tikus telah diasingkan secara rawak kepada 4 kumpulan, iaitu kumpulan palsu, kawalan, indometasin, dan A. lappa. Setelah dibius dengan campuran isofluorane O2 2%, tikus-tikus tersebut disuntik menggunakan 50 μL MIA (40 mg/m; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) secara intra-artikular ke dalam sendi lutut untuk membawa kepada OA eksperimental. Rawatan dijalankan seperti berikut: kumpulan kawalan dan kumpulan palsu hanya dikekalkan dengan diet asas AIN-93G. Cuma, kumpulan indometasin diberikan indometasin (3 mg/kg) yang dimasukkan ke dalam diet AIN-93G dan kumpulan A. lappa 300 mg/kg diberikan kepada diet AIN-93G yang ditambah dengan A. lappa (300 mg/kg). Rawatan diteruskan selama 24 hari sejak hari induksi OA pada kadar 15–17 g setiap 190–210 g berat badan setiap hari.
2.5. Pengukuran Galas Berat
Selepas induksi OA, pengukuran kapasiti galas berat anggota belakang tikus telah dilakukan dengan ketidakupayaan-MeterTester600 (IITC Life Science, Woodland Hills, CA, USA) seperti yang dijadualkan. Taburan berat pada anggota belakang telah dikira: kapasiti galas berat (%)
